北京诺赛基因组研究中心有限公司

诺赛基因可以提供专业，个性化定制的基因组服务，我们拥有先进的仪器设备以及一系列专业的基因组解决方案，可以确保您得到快速准确的服务以及专业全面的检测报告。

技术服务

一、TA克隆

项目介绍

TA克隆技术（TA cloning）利用Taq聚合酶具有末端转移酶活性，可在PCR产物的3'端加上一个非模板依赖碱基“A”。T载体是一种高效克隆PCR产物的专用开环载体。因其3'端带有一个突出的“T”尾，能高效地与带“A”尾的PCR产物连接，极大地提高了克隆的效率。TA克隆是目前克隆PCR产物最简便、快捷的方法。

实验流程

送样要求

（1）TA克隆项目的样本类型一般是以PCR产物居多，或是特异性酶切产物片段，用于做TA克隆的样本建议长度≤3K。

（2）需要提供克隆片段的相关信息，包括名称、大小、样品是否带有“A”尾以及PCR产物是否已纯化。已纯化的PCR产物请确保使用的溶剂为灭菌的双蒸水。

（3）PCR已纯化样品，要求浓度≥20ng/µl，体积≥20µl；PCR未纯化样品，要求浓度≥50ng/µl，体积≥25µl。所需DNA的总量会随片段大小的不同而有所变化。样品定量检测结果以实际为准。

（4）请务必在订单上注明 PCR所用引物序列，便于克隆结果的核对分析。

提供的结果

（1）测序原始图谱和序列。

（2）要求测通的样品可以提供拼接序列。

备注：

（1）鉴定结果以测序序列（或拼接序列）、质粒返样形式呈现。

（2）当克隆结果中包含客户提供的单向部分引物序列，即视实验成功。

（3）若序列中包含高GC、Poly等特殊或复杂结构导致测序中断，属于非实验因素，实验也属于成功检测。

（4）项目完成客户若无要求返还菌液或质粒等，则默认保存一个月后由我司灭菌消毁。

技术原理

（1）E-mail：测序部dnaseq@vip.163.com。

（2）电话订购：010-67873039/4478，010-67868644；李经理：13522520637；王经理：15210696931。

（3）QQ咨询：——————。

（4）相关资料：TA克隆测序订购表。

二、菌种鉴定

项目介绍

菌种鉴定一般是指提取样品基因组DNA，然后PCR扩增相对应的片段，经上机测序之后，在数据库GeneBank比对序列即可。菌种鉴定项目一般采用核酸序列分析法分析细菌16S rDNA/16S-23S rDNA区间序列、酵母18S rDNA/26S rDNA（D1/D2）序列及丝状真菌的18S rDNA/ ITS1-5.8S-ITS2序列，提供科学的鉴定结果。一般序列相似度在98%以上，可以认为是同一个种细菌（DNA序列仅作为一个参考指标）。

实验流程

送样要求

菌种鉴定项目的样本类型一般是沉菌/单菌落菌液/平板（以单菌落/平板为宜）。

送样要求：

（1）建议务必仔细阅读、填写和提交《微生物菌种鉴定评价协议书》，未填写协议书的样品不予受理。（此项可以参考CICC菌种鉴定与评价服务项目）。

（2）委托鉴定菌株应为非致病菌，且来源明确；若属于中华人民共和国卫生部制定的《人间传染的病原微生物名录》之内菌株，将停止鉴定实验。

（3）需要提供送检样本的相关信息，包括名称、培养基相关信息、菌落平板生长时间。且平板样本需要出现单菌落，建议使用分区划线法，避免平板上菌落过于密集生长。

（4）请务必在订单上注明菌种鉴定详细需求，一般默认是鉴定到属。

（5）项目完成两周后，若客户无要求返还平板样品等，则默认灭菌处理。

Pacbio测序实验流程

鉴定结果一般是以测序序列（或拼接序列）、菌种鉴定报告形式呈现，包括：
（1）菌种鉴定报告（文档）
（2）测序原始图谱和序列
（3）样品拼接序列

Pacbio测序实验流程

（1）E-mail：测序部dnaseq@vip.163.com。

（2）电话订购：010-67873039/4478，010-67868644；李经理：13522520637；王经理：15210696931。

（3）QQ咨询：——————。

（4）相关资料：菌种鉴定订购单。

三、SNP位点（单核苷酸多态性分析）检测

项目介绍

SNP（single nucleotide polymorphism），即单核苷酸多态性或单碱基多型性，主要是指在基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的DNA序列多态性，是一种较为常见的人类可遗传的变异。SNP以单个碱基的颠倒、转换、插入和缺失等形式存在。SNP检测服务是检测染色体基因组中单个核苷酸的突变而引起的DNA序列的多态性的技术服务。作为第三代分子遗传标记，与其他分子标记相比，SNP分辨率最高也最为丰富，覆盖基因组范围大，遗传上比较稳定。

方法	仪器平台	单个反应点数	应用领域
TaqMan探针法	荧光定量PCR	1-2	大量样本且检测位点少
扩增测序方法	ABI测序仪	1-5	样本最少且位点数少、位点验证发现特定区域内的SNP
SNaPshot法	ABI测序仪	1-15	中等样本数且检测位点数中等通量
ARMS-PCR 法	ABI测序仪	1-20	有长期常规需求或特大量样本.如临床需求、大田作物检测等。
KASP方法	7900PCR仪	数个至数十	技术成熟，通量越高优势越明显
MassARRAY 法	Sequenom质谱仪	1-30	大量样本且中等通量检测、不涉及荧光标记的检测
芯片法	SNP芯片	数十万	人源样本高通量位点检测
目标区域测序/ 重测序	高通量测序平台	数万至数百万	全基因组检测、特定或复杂需求发现新的SNP
高通量扩增子测序	高通量测序平台	数十至数万	个性化定制中高通量panel

送样要求

SNP位点检测项目的样本类型一般是核酸DNA。

（1）需要提供样本的相关信息，包括样本名称及数量、核酸类型、检测位点数量等。

（2）在订单上注明样本的检测需求，根据不同的方法进行实验设计。

（3）组织样品送的核酸样本≥300mg；血液样本≥1ml；游离DNA≥1ng；基因组类样品要求浓度≥50ng/µl，体积≥20µl。

（4）项目完成两周后，若客户无要求返还样品等，则默认为样品将被处理。

提供的结果

检测结果一般是以测序序列（或拼接序列）和文字表格形式呈现。

可以提供的结果如下：

（1）设计、合成的SNP位点引物。

（2）测序原始图谱和序列。

订购信息

（1）E-mail：测序部dnaseq@vip.163.com。

（2）电话订购：010-67873039/4478，010-67868644；李经理：13522520637；王经理：15210696931。

（3）QQ咨询：——————。

四、实时荧光定量PCR

项目介绍

实时荧光定量PCR（Quantitative Real-time PCR,qPCR）是通过对PCR扩增反应中每一个循环产物荧光信号的实时监测从而实现对起始模板定量及定性的分析。主要分为荧光染料法（SYBR Green I）和荧光探针法（Taqman 技术）。

实验流程

SYBR GreenI是荧光定量PCR常用的DNA结合染料之一，可以与双链DNA非特异性结合。SYBR Green I在游离状态下会发出微弱的荧光，一旦与双链DNA结合，其荧光值会指数级增加。所以，一个PCR循环反应发出的全部荧光信号与双链DNA量呈比例，随着PCR扩增产物的增加而增加，其荧光信号强度与PCR产物的数量呈正相关。

荧光探针法（Taqman 技术）是指PCR扩增时，加入一对引物的同时再加入一个特异性的荧光探针。该探针为一条寡核苷酸，两端分别标记一个荧光报告基团和一个荧光淬灭基团。探针完整时，报告基团发出的荧光信号被淬灭基团吸收，PCR 仪检测不到荧光信号；在PCR扩增时（延伸阶段），Taq 酶的5'-3'切酶活性将探针酶切，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统接收到荧光信号。即每扩增一条DNA链，即形成一个荧光分子，实现了荧光信号的累积与 PCR 产物形成同步。